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產品名稱:細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒

產品型號:P0027

產品報價:

產品特點:細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從培養細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白與細胞漿蛋白的方法。約90分鍾就可以完成培養細胞的細胞核蛋白與細胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用於Western,EMSA,footprinting,報告基因檢測以及酶活力測定等後續操作

P0027細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒的詳細資料:

本試劑盒是通過細胞漿蛋白抽提試劑A和B,在低滲透壓條件下,使細胞充分膨脹,然後破壞細胞膜,釋放出細胞漿蛋白,然後通過離心得到細胞核沉澱。zui後通過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。
本試劑盒可以抽提50個樣品,如果每個樣品的數量為約二百萬細胞或約60毫克組織。
包裝清單:

產品編號

產品名稱

包裝

P0027-1

細胞漿蛋白抽提試劑A

10ml

P0027-2

細胞漿蛋白抽提試劑B

0.5ml

P0027-3

細胞核蛋白抽提試劑

2.5ml

說明書

1份

 

使用說明:
1. 準備溶液:溫融解試劑盒中的三種試劑,溶解後立即放置在冰上,混勻。取適當量的細胞漿蛋白抽
提試劑A備用,在使用前數分鍾內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。取適當量的細胞核蛋白抽提試
劑備用,在使用前數分鍾內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對於貼壁細胞:用PBS洗一遍,用細胞刮子刮下細胞,或用EDTA溶液處理細胞使細胞不再貼壁很緊,
並用移液器吹打下細胞。離心收集細胞,盡zui大努力吸盡上清,留下細胞沉澱備用。盡量避免用胰酶
消化細胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對於懸浮細胞:用PBS洗一遍,離心收集細胞,盡zui大努力吸盡上清,留下細胞沉澱備用。
4. 每20微升細胞沉澱加入200微升添加了PMSF的細胞漿蛋白抽提試劑A。(對於二百萬Hela細胞,其細胞
沉澱的體積大約為20微升或40毫克。)
5. zui高速劇烈Vortex 5秒,把細胞沉澱完全懸浮並分散開。(如果細胞沉澱沒有完全懸浮並分散開,可
以適當延長vortex時間。)
6. 冰浴10-15分鍾。
7. 加入細胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。zui高速劇烈Vortex 5秒,冰浴1分鍾。
8. zui高速劇烈Vortex 5秒,4℃ 12,000-16,000g離心5分鍾。
9. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中,即為抽提得到的細胞漿蛋白。可以立即使用,也可以凍存。(千
萬不要觸及沉澱,可以在沉澱上方保留極小體積的上清,以免觸及沉澱。)
10. 對於沉澱,完全吸盡殘餘的上清,加入50微升添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清會
帶來細胞漿蛋白的汙染。)
11. zui高速劇烈Vortex 15-30秒,把細胞沉澱完全懸浮並分散開。然後放回冰浴中,每隔1-2分鍾再高速
劇烈Vortex 15-30秒,共30分鍾。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鍾。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中,即為抽提得到的細胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70℃凍
存。
14. 對於新鮮組織:
A. 把組織盡可能切成非常細小的碎片。按照20:1的比例混合適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A和B(例
如200微升細胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。並加入PMSF至zui終濃度為1mM配製成
組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液,並在玻璃
勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進行。
B. 勻漿後把勻漿液轉移到塑料離心管內,冰浴放置15分鍾。
C. 4℃ 1,500g離心5分鍾。把上清轉移至一預冷的塑料管中,為抽提得到的部分細胞漿蛋白。(吸上
清時千萬不要觸及沉澱。)
D. 對於沉澱,到了這一步已經充分勻漿,但很多細胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開
始操作,即把沉澱當做已經離心收集好的細胞沉澱操作,按照步驟4至步驟13抽提得到細胞漿蛋
白和細胞核蛋白。抽提得到的細胞漿蛋白可以和步驟14C中抽提得到的細胞漿蛋白合並。
 

 

保存條件:
-20℃保存,一年有效。
注意事項:
需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鍾內加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506)可以向碧雲天訂購。
抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
本試劑盒對於組織樣品,僅適合於新鮮組織,對凍存過的組織抽提效果很差。可以抽提的組織樣品數通常不足100個。
使用本試劑盒抽提到的細胞核蛋白與細胞漿蛋白均可直接用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)測定蛋白濃度。但不適合用Bradford法測定蛋白濃度。
為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。

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