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Gibco胎牛血清使用中的常見問題
點擊次數:578 發布時間:2019-04-23
   Gibco胎牛血清使用中的常見問題
  1、 如何儲存和解凍Gibco胎牛血清才不會使產品質量受損?
  將血清從冷凍箱取出後,先置於2~8℃冰箱使之融解,然後在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
  長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,並避免反複凍融。
  AG8AG建議血清應保存在-2O℃。若存放於4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
  2、血清中包含絮狀沉澱,它們是什麽,怎麽處理?
  沉澱包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉澱,離心血清(400g,1-2分鍾)或者簡單的讓其沉澱在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶裏(一般不建議采用過濾的方法除去沉澱,因為沉澱會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉澱並加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動並加熱血清至37℃,沉澱會自然消失。
  3、實驗室如何選擇適合的血清?
  國內一致認為HYCLONE的血清是的,但是根據我在北美的經曆,國外一般認為GIBCO比HYCLONE好,所以並不是價格決定質量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產的就夠用了。此外,由於國內HYCLONE,GIBCO並沒有生產線,AG8AG隻能從代理商那裏買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。所以,我一般會從直銷員那裏買血清,有的國外生物公司由於剛剛進入中國,知名度不高,但是其實在國外已經做得很不錯了,如Wisent等,他們在國內有辦事處,我會從那裏拿,血清的品質和HYCLONE不相上下,但價格相對優惠很多。
  4、 如何避免血清中產生沉澱?
  按如下操作可避免沉澱的產生:
  (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生。
  (2) 血清分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
  (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉澱。
  (4) 勿將Gibco胎牛血清置於37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
  (5) 血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
  (6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉澱物的增多。
  5、 培養基中添加了血清和抗生素後,可長期保存嗎?
  一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。
  6、 為什麽要熱滅活血清?
  加熱可以滅活補體係統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
  7、 有必要做熱滅活嗎?
  實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉澱物的形成會顯著的增多,這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受汙染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉澱物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
  若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!
  8、細胞培養中出現黑點是汙染嗎?如何處理?
  一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然後,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否遊動。如果細胞被汙染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。汙染包括細菌汙染、支原體汙染等。
  如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那麽,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:
  (1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
  (2)血清質量不好,反複凍融的結果;
  (3)配製培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;
  (4)配製培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
  (5)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
  9、 細胞培養中如何防止黑點生成?
  (1) 盡可能地減少血清凍融次數。
  (2) 培養基無需37℃水浴。
  (3) 培養基保持zui佳PH值7.0- 7.2。
  (4) 嚴格控製配製培養基的水質,容器定期刷洗。
  (5) Gibco胎牛血清掌握細胞傳代的zui佳時機,細胞切勿生長過老。
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